El profesor de los puzzles de la Nintendo DS se va a la pantalla grande.
El Profesor Layton recibe una carta de la famosa cantante de Opera, Jenice Kaitly, invitándolos a ver su nueva presentación. Le pide a Latyon, Luke y Remi ayuda para resolver un misterio, comentando que su amiga Melina desapareció hace un año pero luego regresó como una niña de siete años diciendo que encontó la fuente de la vida eterna. Dependerá de Layton, Luke y Remi resolver el misterio de la Diva Eterna